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花椒及其制品中麻味物质的含量测定-液相色谱法

A.1 适用范围

      本方法适用于花椒及其制品中麻味物质（以羟基-α-山椒素计）的含量测定。

A.2 试剂

A.2.1甲醇（分子式 CH3OH）：分析纯。

A.2.2无水乙醇（分子式 CH3CH2OH）：分析纯。

A.2.3 羟基-α-山椒素（CAS：83883-10-7， 分子式：C₁₆H₂₅NO₂，分子量：263.38， 纯度＞98%）。

A.3 仪器

A.3.1 分析天平：感量 0.0001g 和 0.00001g。

A.3.2 超声波清洗器（功率：500W）。

A.3.3 高速离心机：≥4500r/min。

A.3.4 液相色谱仪，配紫外检测器。

A.4 仪器参考条件

表 1 仪器参考条件

      注：本液相条件为参考条件，可根据具体色谱分离度适当调整。

A.5 实验步骤

A.5.1 标准溶液的配制

      准确称取羟基-α-山椒素 10mg（精确至 0.01mg），用甲醇溶解并转移至 10mL 棕色容量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得每 1mL 含 1mg 羟基-α-山椒素的对照品储备溶液；准确吸取上述储备溶液 1mL 置 10mL 容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得每 1mL 含 0.1mg 羟基-α-山椒素对照品使用溶液（现配现用）。

A.5.2 标准曲线的配制

      准确吸取上述羟基-α-山椒素对照品使用溶液适量，用无水乙醇配制成 0～100μg/mL 的标准系列工作溶液（现配现用，可根据仪器灵敏度适当调整浓度范围），将标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

A.5.3 样品测定

      花椒和花椒粉：取混匀的样品粉末（过孔径 0.95±0.05mm 筛，约 20 目）约 0.3g，精密称定，置锥形瓶，加入无水乙醇 80mL，超声提取 15 分钟，放冷后转移至 100mL 容量瓶并定容至刻度。摇匀后取适量提取液于 4500r/min 离心 5min。精密量取上清液 1mL，置 10mL 量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，过 0.45μm 滤膜，作为供试品溶液。将供试品溶液注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中羟基-α-山椒素的浓度，按公式（1）计算花椒和花椒粉中麻味物质（以羟基-α-山椒素计）含量。稀释倍数可根据样品含量适当调整。

      花椒油：取混匀的样品约0.3g，精密称定，置锥形瓶，加入无水乙醇80mL，超声提取15 分钟，放冷后转移至 100mL 容量瓶并定容至刻度。摇匀后取适量提取液于 4500r/min 离心5min，取上清液过 0.45μm 滤膜，作为供试品溶液。将供试品溶液注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中羟基-α-山椒素的浓度，按公式（1）计算花椒油中麻味物质（以羟基-α-山椒素计）含量。稀释倍数可根据样品含量适当调整。

      花椒提取物：取混匀的样品约 0.3g，精密称定，置锥形瓶，加入无水乙醇 80mL，超声提取 15 分钟，放冷后转移至 100mL 容量瓶并定容至刻度。摇匀后取适量提取液于 4500r/min 离心 5min。精密量取上清液 1mL，置 50mL 量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，过 0.45μm 滤膜，作为供试品溶液。将供试品溶液注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中羟基-α-山椒素的浓度，按公式（1）计算花椒提取物中麻味物质（以羟基- α-山椒素计）含量。稀释倍数可根据样品含量适当调整。

A.6 计算

      试样中麻味物质的含量按公式（1）计算：

      式中：

      X ——试样中待测组分的含量，单位为克每百克（g/100g，以羟基-α-山椒素计）；

      c ——试样溶液中待测组分的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

      v ——样品经无水乙醇提取后的定容体积，单位为毫升（mL）；

      m ——试样的称样量，单位为克（g）；

      f ——无水乙醇提取定容后的稀释倍数； 计算结果保留三位有效数字。

A.7 精密度

      在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。

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